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Verdauung von Eieralbumin durch Pepsin
Prinzip
Schwerlösliches, hitzekoaguliertes Eieralbumin wird durch Pepsin in lösliche Peptide aufgespalten. Diese werden im Überstand nach Abzentrifugieren von noch ungelöstem Eieralbumin mit dem Biuret-Test nachgewiesen.
Lösungen
- Pepsin (4 mg/ml) in 0.1 M HCl
- 0.1 M HCl
- Biuret-Reagens (siehe Exp. 1.3)
- 0.1 M HCl
Ausführung
2 vorbereitete RG, die je 70 mg hitzekoaguliertes Eieralbumin enthalten, mit I und II beschriften:
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Ansätze |
I |
II |
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Eieralbumin |
70 mg |
70 mg |
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0.1 M HCl |
5 ml |
- |
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Pepsinlösung in 0.1 M HCl |
- |
5 ml |
Sofort gut mischen und 30 min ins 40°C-Wasserbad stellen. Alle 10 min RG schütteln. Menge unlösliches Eieralbumin abschätzen (0 bis ++++).
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Resultat |
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Beide RG in der Tischzentrifuge bei höchster Tourenzahl 10 min zentrifugieren.
2 ml Überstand in ein neues RG pipettieren.
Zum Nachweis löslicher Peptide 4 RG beschriften folgende Lösungen zugeben:
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Ansätze |
A |
B |
C |
D |
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0.1 M HCl (Kontrolle für B) |
1 ml |
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Überstand aus I |
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1 ml |
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Pepsinlösung (Kontrolle für D) |
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1 ml |
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Überstand aus II |
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1 ml |
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Biuret Reagens |
5 ml |
5ml |
5 ml |
5 ml |
Inhalt mischen und RG 5 min stehenlassen. Extinktion bei 546 nm messen (Nullwert mit Luft abgleichen) und in folgende Tabelle eintragen:
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Ansätze |
A |
B |
C |
D |
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E546 |
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E546 - E546 Kontrolle |
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Erklären Sie die Resultate qualitativ.
Fragen
- Was können Sie über die Grösse der hydrolysierten Peptide in Ansatz D aussagen?
- Warum ist der pH-Wert im Magen tief?
- Wie entsteht der tiefe pH-Wert?
