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Verdauung von Triacylglycerinen mit Lipase
Prinzip
Pankreas-Lipase katalysiert die partielle Hydrolyse von Triacylglycerinen. Die entstehenden freien Fettsäuren werden mit einem pH-Indikator nachgewiesen. Tetrahydrolipstatin hemmt die Pankreas-Lipase (Wirkstoff des Medikaments Xenical).
Lösungen
- 0.46 M Na-Cholat
- 1 mg/ml Tetrahydro-Lipstatin in 98% Ethanol
- 98% Ethanol
- Olivenöl
- Phenolrot ( pH-Indikator, sauer: gelb; alkalisch: rot; pKa = 7.9 )
- 0.025 M NaOH
- Lipaselösung
Ausführung
Die Lipase wird mit oder ohne Tetrahydrolipstatin bei Raumtemperatur vorinkubiert. Zu diesem Zweck drei kleine Plastikröhrchen vorbereiten:
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Voransätze |
A1 |
B1 |
C1 |
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Na-Cholat in Wasser |
0.2 ml |
0.2 ml |
0.2 ml |
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Ethanol |
0.2 ml |
- |
0.4 ml |
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TH-Lipstatin in Ethanol |
- |
0.2 ml |
- |
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Lipase (Pankreas-Extrakt) |
0.2 ml |
0.2 ml |
- |
Inhalt mischen und Röhrchen 5 Minuten stehen lassen. In dieser Zeit 3 grosse RG für die Verdauung vorbereiten:
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Verdauungsansätze |
A2 |
B2 |
C2 |
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Ethanol |
2 ml |
2 ml |
2 ml |
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Olivenöl |
1 Tr. |
1 Tr. |
1 Tr. |
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RG mit Parafilm verschliessen und mit Schüttelmischer gut mischen (Bildung einer Emulsion). |
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Wasser |
2 ml |
2 ml |
2 ml |
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Phenolrot |
100 µl |
100 µl |
100 µl |
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0.025 M NaOH |
50-100 µl |
50-100 µl |
50-100 µl |
sauer: gelb, alkalisch: rot; pKa = 7.9, NaOH in kleinen Portionen zugeben (10-20 ul) bis die Lösung rot wird.
RG mit Parafilm verschliessen und auf Schüttelmischer gut mischen.
Die Voransätze zu den entsprechenden Verdauungsansätzen zugeben (A1 zu A2, etc.), mischen.
RG ins Wasserbad stellen (40oC) und Farbänderungen nach 20-30 Minuten beobachten.
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Ansätze |
A |
B |
C |
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Farbe |
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